关键词：生物缓冲剂、HEPES、4-羟乙基哌嗪乙磺酸

  HEPES中文全称 4-羟乙基哌嗪乙磺酸，CAS号为：7365-45-9，pH 缓冲范围6.8 - 8.2 ，在25℃下，其pKa 值为7.5。HEPES-Na即N-(2-羟乙基)哌嗪-N'-(2-乙磺酸)钠盐，其CAS号为75277-39-3。HEPES和HEPES-Na都是非常重要的生物缓冲剂，在生物制药、医疗诊断等领域有广泛应用。

HEPES是一种两性离子缓冲剂，应用于针对各种类型有机体的细胞培养基、蛋白质研究，还可用于生化诊断试剂盒、DNA/RNA提取试剂盒及PCR诊断试剂盒里，因具有对细胞无毒性作用且能长时间控制恒定的pH范围等优点，常备用作化妆品添加剂，起到活性剂、脱皮剂、促透剂等作用。

HEPES和HEPES-Na的区别：HEPES-Na又称有机HEPES碱，与HEPES是共轭酸碱的关系，两者本质上一样，不过两种物质溶解后的pH不同。

HEPES的制备方法：

关于HEPES缓冲溶液的配制,根据用途配制,一种是单纯的HEPES＋NaOH,另一种是HEPES＋盐。各种配制方法总结如下：

一、500ml 1 M HEPES, pH = 7.0 Stock solution的配制

119.15 g HEPES 溶解在400ml蒸馏水中,加0.5~1M 的NaOH水溶液调节至少所需pH（HEPES的有效pH 范围是6.8~8.2）,然后用蒸馏水定容至500ml,于4摄氏度保存。

二、加少量盐的HEPES Buffer配方（500ml）

HEPES 6.5g、NaCl 8.0g、Na2HPO4.7H2O 0.198g、用0.5M NaOH 水溶液调节pH值,最后定容。

三、2×HEPES缓冲盐溶液的配制

将1.6g NaCl、0.074g KCl、0.027g Na2HPO4.2H2O、0.2g葡聚糖(glucan or dextran)和1g HEPES溶解在90ml的蒸馏水,用0.5M NaOH调节至所需pH值,再用蒸馏水定容至100ml即可。

HEPES-Na的制备方法：

HEPES-Na可以通过4-羟乙基哌嗪与乙烯基磺酸钠合成，也可以采用羟乙基磺酸、氢氧化钠及4-羟乙基哌嗪高压合成，目前符合生物缓冲剂要求的最广泛的制备方法是将HEPES与NaOH反应生成HEPES-Na。具体制备步骤如下：

氮气保护下将纯度在90-99%之间的HEPES和NaOH固体或溶液进行反应0.2-1小时，反应温度为20-100℃，反应完成后，将所得产物进行脱色、过滤、浓缩、除水、结晶、洗涤、干燥等操作，得到HEPES-Na。

这种制备方法工艺简单，操作方便，且所得HEPES-Na产物收率高，产品纯度高,可达到生物缓冲剂的纯度要求。

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